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本试剂盒多用于动物血清、血浆、组织等样本中的总蛋白含量测定，无需与标准品进行比对，双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物，呈紫色，所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比例，可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。双缩脲比吸光度比色法是按照Doumas方法所规定的双缩脲试剂、控制反应条件和校准分光光度计的情况下，根据蛋白质双缩脲复合物的比吸光度，无需检测标准品吸光度，直接计算出总蛋白质浓度，该试剂盒120T可检测约60个样本。

• 上述计算公式是以所用酶标仪波长准确，带宽≤2nm时，总蛋白含量根据比吸光度直接计算。
  
• 如果没有酶标仪，也可以使用分光光度计测定，使用分光光度计测定蛋白浓度时每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少，检测比色杯准确光径很重要，可用钴盐或重铬酸钾进行检测，其吸光度分别为0.556和0.535，如检测的吸光度与实际不符，应进行校正，校正系数F=A_s/A_m。其计算公式为:总蛋白(g/L)=(A_c/0.298)×51×F。
  
• 检测中发现所有孔都呈暗紫色，可能原因是样品含有还原剂，应适当透析或稀释样品。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 样本处理：血清、血浆样本直接取20μL检测，对于组织样本，按组织质量(g)∶生理盐水(ml)=1∶9比例，加入9倍体积的生理盐水或PBS，冰浴下匀浆后，2500g离心10min，取16μL上清待检。
  
• TP加样：按照下表设置系列孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行孔。
  

  加入物(μL)	蒸馏水 调零孔	双缩脲 调零孔	试剂 空白孔	样本 空白孔	测定孔
  ddH2O	216	—	16	—	—
  待检样品(血清、血浆、组织匀浆液)	—	—	—	16	16
  双缩脲空白试剂	—	216	—	200	—
  Doumas双缩脲试剂	—	—	200	—	200

• TP测定：混匀，25℃孵育30min，用经过校准的精密酶标仪，测定540nm波长的吸光度；读取测定孔和试剂空白孔的吸光度时，以蒸馏水调零孔调零；读取样本空白孔的吸光度时，以双缩脲调零孔调零。